原理

色譜條件

悟空K2025高效液相色譜儀：K2025P2二元高壓輸液泵、K2025AS自動進樣器、K2025CO柱溫箱、K2025UVD 紫外-可見光檢測器、K2025ELSD 蒸發(fā)光散射檢測器、Wookinglab色譜工作站；

色譜柱：C₁₈，4.6×250 mm，5 µm或者相當?shù)纳V柱；

流動相：以乙腈為流動相A，水為流動相B，按下表進行梯度洗脫：

注：為了系統(tǒng)在進樣前達到平衡，每次進樣前運行10min。

進樣量：酸棗仁皂苷A對照品溶液5 μL、15 μL，供試品溶液及斯皮諾素系列標準工作液10 μL；

洗針液：90 %甲醇水溶液；

柱溫：25℃；

檢測器及參數(shù)：紫外-可見光檢測器，檢測波長為335 nm；蒸發(fā)光散射檢測器，蒸發(fā)溫度為80℃，氣體流量為3.0 L/min。

使用紫外-可見光檢測器對斯皮諾素測定

重復性測試

按照色譜條件進行采集，將斯皮諾素標準溶液（濃度為50 μg/mL）進樣10 μL，色譜圖如圖1所示，積分結果如表1所示。

圖1 斯皮諾素標準溶液的色譜圖

表1 斯皮諾素標準溶液色譜圖積分結果

由表1中數(shù)據(jù)可知，斯皮諾素峰的理論塔板數(shù)為48818，拖尾因子為1.21，具有良好的峰形。

將斯皮諾素標準溶液連續(xù)進樣7針，疊加的色譜圖如圖2所示，結果見表2。

圖2 斯皮諾素標準溶液連續(xù)進樣7針疊加的色譜圖

表2 斯皮諾素標準溶液連續(xù)進樣7針重復性數(shù)據(jù)統(tǒng)計

由表2中數(shù)據(jù)可知，斯皮諾素標準溶液連續(xù)進樣7針，保留時間的RSD為0.09 %，峰面積的RSD為0.40 %，具有良好的定性定量重復性。

含量測定

按照色譜條件，將斯皮諾素系列標準工作液上機測定，斯皮諾素在5.0 μg/mL~200.0 μg/mL濃度范圍內呈現(xiàn)良好的線性關系，確定系數(shù)R²＞0.999。斯皮諾素系列標準工作液疊加的色譜圖如圖3所示。

圖3  斯皮諾素系列標準工作液疊加的色譜圖

使用蒸發(fā)光檢測器對酸棗仁皂苷A的測定

酸棗仁皂苷A對照品溶液色譜圖

按照色譜條件進行采集，將酸棗仁皂苷A對照品溶液進樣15 μL，色譜圖如圖4所示，積分結果如表3所示。

圖4  酸棗仁皂苷A對照品溶液的色譜圖

表3  酸棗仁皂苷A對照品溶液色譜圖積分結果

由表3中數(shù)據(jù)可知，酸棗仁皂苷A峰的理論塔板數(shù)為503314，拖尾因子為1.08，具有良好的峰形。

含量測定

外標兩點對數(shù)方程

精密吸取酸棗仁皂苷A對照品溶液5 μL、15 μL與供試品溶液10 μL，依次注入液相色譜儀中測定。不同進樣量酸棗仁皂苷A對照品溶液的色譜圖如圖5所示。

圖5  不同進樣量酸棗仁皂苷A對照品溶液的色譜圖

結論